Endotoxin & Glucan Referenzinformationen
WAS IST ENDOTOXIN?
Endotoxin ist ein Bestandteil der Zellwand in Gram-negativen Bakterien. Insbesondere ist Endotoxin ein Hauptbestandteil des äußeren Teils des äußeren Membran der gram-negative Zellwand. Endotoxin ist ein sehr starkes Pyrogene und ein bakterielles Toxin betrachtet.
Endotoxin ist ein Lipopolysaccharid (LPS). Es gibt zwei große Teile dieses Molekül, das Polysaccharid und Lipid A. Das Polysaccharid ist nicht toxisch. Es ist hydrophil und nach außen gerichtet von der Zellmembran und in das Medium, in dem die Bakterien wachsen. Es enthält wichtige Antigene der Bakterien und ist das wichtigste Ziel von Gram-negativen Bakterien, die für die Immunantwort. Jede Art von Gram-negativen Bakterien macht sein eigenes einzigartiges LPS-Molekül. Der Polysaccharid-Teil des Moleküls ist sehr variabel.
Lipid A ist die toxische Komponente von LPS. Lipid A ist aus einem Disaccharid (Glucosamin), die Phosphatgruppen und Fettsäuren zusammengesetzt ist. Der Fettsäureanteil des Moleküls ist sehr hydrophob und steht nach innen in Richtung der Mitte des äußeren Membran. Dies bewirkt, dass LPS in ähnlicher Weise wie Phospholipiden verhalten, die die meisten Membranen bilden. Es ist viel weniger Variabilität unter Bakterien in der Zusammensetzung der Lipid A, und es ist vor allem in den Fettsäureketten gefunden.
Warum Test für Endotoxin? Endotoxin verursacht Nebenwirkungen beim Menschen. Wenn Endotoxinen in Arzneimitteln, Geräte oder andere im Inneren des Körpers abgestellte Gegenstände, können sie Krankheiten verursachen. einzunehmenden Medikamente müssen oral nicht auf Endotoxin getestet werden. Bakterien müssen nicht am Leben sein für Endotoxin toxisch. In der Tat ist Endotoxin in lebenden Bakterien weniger toxisch als wenn die Bakterien tot sind, weil Endotoxin aus toten Zellen freigesetzt wird, wodurch die scheinbare Dosis erhöht wird.
Endotoxin ist relativ hitzestabil. Es wird überleben gemeinsame Wärmebasierten Desinfektions- und Sterilisationsverfahren. Daher sterile Elemente sind nicht notwendigerweise von Endotoxin frei.
WEITERE INFORMATIONEN
Pyrogen: A Pyrogen ist jede Verbindung, die zu einer pyrogenen Reaktion ergibt, die durch Fieber gekennzeichnet ist. Endotoxin ist die stärkste natürliche Pyrogene und ein potenzielles Gesundheitsrisiko für die Menschen. In großen Dosen, Endotoxine können Schock und Tod führen.
Bakterielle Toxine: Es gibt drei Klassen von bakteriellen Toxinen. Endotoxine ist der Name „Endo“, weil sie Teil der Zellwand sind und nicht in großen Mengen freigesetzt, wenn die Zelle zerstört wird. Endotoxine sind nur gramnegative Bakterien hergestellt. Exotoxine werden aktiv von Bakterien abgesondert, während sie noch am Leben und wächst. Enterotoxine sind im Darm und verursachen Durchfall und Ruhr ausgeschieden.
VORSCHRIFTEN ASPEKTE DER ENDOTOXIN TESTEN
Die FDA genehmigt Grenzwerte für die Belastung und Prüfverfahren für Endotoxin. Die USP, in Verbindung mit der EP und JP, Testverfahren für Endotoxin-Tests verfeinern.
Es gibt mehrere wichtige regulatorische Dokumente, die beschreiben, wie Medikamente, Geräte, Dialysat, Wasser und andere Substanzen sind für Endotoxin getestet werden.
Eine Grenze aufgelistet für ein compendial Medikament hat Vorrang vor berechneten Werten.
- Grenze für Parenteralia: 5,0 EU / kg. Angenommen, ein 70 kg erwachsenen Menschen, es sei denn, Drogen an Kinder verabreicht wird.
- Grenze für Medikamente werden intrathekal injiziert: 0,2 EU / kg.
- Grenze für Geräte: 20 EU / Gerät
- 2.15 EU / Gerät: Grenzwert für Geräte intrathekal verwendet
WAS IST GLUCAN?
Glucane sind eine Klasse von Polysacchariden. Genauer gesagt, sie sind Ketten von Glucose, die in der Regel verzweigt sind und teilweise vernetzt ist. Sie sind ein Teil der Zellwand in Pilzen (Hefen und Schimmelpilze), Algen, einige Bakterien und Pflanzen, in denen sie die mechanische Festigkeit und Integrität der Wand beitragen.
AUSWIRKUNGEN DER GLUCAN
(1 → 3) -ß-D-Glucane sind Immunmodulatoren. Folk Heilmittel aus vielen Kulturen verwenden Pilze Heilung zu unterstützen. Es wird angenommen, dass die heilende Wirkung auf die Glucane in den Pilzen zurückzuführen ist. Es gibt viele Arten von (1 → 3) -ß-D-Glucane und physikalische und chemische Eigenschaften des Moleküls seine biologischen Aktivitäten beeinflussen. (1 → 3) -ß-D-Glucane sind dafür bekannt, zu binden und Makrophagen, Neutrophilen, Monozyten und NK-Zellen aktivieren. Sie sind vermutlich auf eine Vielzahl von Zellen binden, zB Endothelzellen und Fibroblasten.
Unter den biologischen von Glucane verursachten Effekte ist die Produktion von Cytokinen, die wichtigen Komponenten bei der Entzündung sind. Andere Aktivitäten, die mit Glucane sind Stickoxid-Synthese, Aktivierung der Komplementkaskade und Aktivierung von Lymphozyten und Makrophagen.
Es gibt Hinweise aus Tierstudien, die Glucan und Endotoxin synergistisch die Entzündungsreaktion zu erhöhen, wirken kann. In einigen Studien wurde diese Synergie zur Behandlung von Krebs.
Für die Hersteller von Arzneimitteln und Geräten (1 → 3) -ß-D-Glucane wird eine Verunreinigung betrachtet. Obwohl die FDA diese immunstimulatorischen Verunreinigung nicht reguliert, kann es aus zwei Gründen von Bedeutung sein. Eines, das Vorhandensein von (1 → 3) -ß-D-Glucane kann eine falsch höhere Lesung im LAL-Test auf Endotoxine geben. Dies könnte produzieren und Out-Of-Spezifikation Ergebnis. Zwei, (1 → 3) -ß-D-Glucane kann zu Nebenwirkungen bei Patienten beitragen.
Häufige Quellen von Glucane erfahren durch Drogen-und Gerätehersteller sind aus Filter aus Cellulosematerialien, aus Pflanzen gewonnene Rohstoffe, baumwollhaltigen Gehäuse, Zucker, natürlich gewonnenen Rohstoffe, Celluloseprodukte (zum Beispiel Schwämme) usw.
Beispiele für Produkte enthalten Glucan Kontamination gefunden enthalten Blutprodukte (Albumin, Plasmaprotein, Immunglobulin-Präparate, Gerinnungsfaktoren), Oligonukleotid-Arzneimittel, Kollagenprodukte, Salzzubereitungen, Glucose Präparate und Wasser zur Injektion.
Es gibt zwei Ansätze zum Testen für Glucan. Eines, das Subtraktionsverfahren, verwendet zwei Tests für Endotoxin, von denen einer eine blockierende Substanz hat die Antwort des Assays zu verringern, in der Probe Glucan. Der Unterschied zwischen den beiden Ergebnissen ist auf die Menge des Glucans vorliegenden proportional. Zwei, eine direkte Messung von (1 → 3) -ß-D-Glucane. Eine direkte Messung Assay ist spezifisch für (1 → 3) -ß-D-Glucane. Es ist quantitativ, spezifisch und wesentlich genauer als die Subtraktion Methode. Die einzigen verfügbaren Versionen dieses Tests sind Glucatell ® und Fungitell genannt ® und beide sind nur verfügbar, von Associates of Cape Cod, Inc. Für weitere Informationen klicken Sie auf die Links unten.
COMMON Prüfprobleme
HEMMUNG
Die Hemmung ist gekennzeichnet durch eine positive Produktkontrolle (PPC), die bei weniger als 50% in einem chromogenen oder turbidimetrischen Assay oder einem Ausfall des 2 # 955 PPC gerinnt gewonnen. Die Hemmung kann auch ein Ergebnis verursacht niedriger als es sein sollte. Es gibt mehrere mögliche Ursachen:
- Der pH-Wert. Der LAL-Test funktioniert am besten zwischen pH 6,0 bis 8,0. Je weiter der pH-Wert der Testlösung aus diesem Bereich ist, desto mehr wird die Hemmung gesehen werden. Überprüfen Sie den pH-Wert der Probe um sicherzustellen, dass es im richtigen Bereich liegt. Wenn die Probe nahe ist, Zugabe von Pyrosol, ein Puffermittel, wird dazu beitragen, die Probe in den richtigen Bereich zu bringen. Andere Proben werden neutralisiert werden.
- Organische Lösungsmittel. Organische Lösemittel hemmen das Assay durch die Aktivität von Enzymen hemmen. Verdünnen Sie die Probe mit Wasser.
- Ausfällungen. Ausfällungen wird sich negativ auf die chromogenen Assay beeinflussen, da der Lichtweg blockiert wird. Verdünnen Sie die Probe.
- Salz. Wenn die Konzentration zu hoch ist, werden die Enzyme des Tests nicht in der Lage sein, effizient zu arbeiten. Verdünnen Sie die Probe.
ERWEITERUNG
Verbesserung wird gekennzeichnet durch eine positive Produktkontrolle (PPC), die auf mehr als 200% in einer chromogenen oder turbidimetrischen Assay gewonnen. Die meisten Gel-Clot-Assays können nicht Verbesserung erkennen. In der Inhibition-Enhancement-Assay, die Verbesserung in einer Gel-Clot-Assay wird, wenn die Standard-Gerinnseln 0,25 # 955 Produkt angenommen. Verstärkung kann auch Ergebnisse verursachen gemeldet als höher als sie sein sollten. Es gibt mehrere mögliche Ursachen: