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Eine Agarplatte mit Mikroorganismen aus einer Tiefseeschwamm isoliert.
Eine Agarplatte ist eine sterile Petrischale, die Agar und Nährstoffe enthalten, und wird zur Kultur von Bakterien oder Pilzen verwendet wird. Im Allgemeinen ‚Auswählen‘ Stoffe sind ebenfalls an der Platte, wie zum Beispiel Antibiotika zugesetzt.
Herstellung von Agarplatten bearbeiten
Die meisten Arten von Agar werden in Pulverform vorgefertigter gekauft, obwohl es möglich ist, eine Basis-Agar-Mischung zu kaufen, und fügen Sie Nährstoffe getrennt. Für eine typische Standardmischung von Lauria-Bertani (LB) -Agar, wird das folgende pro Liter destilliertes Wasser zugegeben, während auf einem automatischen Rührer:
- 10 g einer Aminosäure (üblicherweise Trypton oder Pepton)
- 5 g Hefeextrakt
- 5 g NaCl
- 15 g Agarose (Weglassen Dieser Schritt erzeugt flüssige LB)
- Hände gründlich mit antimikrobiellen Seife und heißem Wasser gewaschen.
- Die Bank wird mit Ethanol oder einem anderen Desinfektionsmittel abgewischt
- Ein Bunsenbrenner wird mit einer sanften blauen Flamme eingerichtet. Dies wird verwendet, um die Öffnung des Kolbens zu sterilisieren, und wird bietet auch eine einigermaßen sterile Umgebung in der Nähe. Dies wird auch Platten verwendet werden, um Flamme, die Blasen aus Gießen zu entwickeln.
- Die Anzahl der Platten gegossen werden soll, wird auf der Bank angeordnet, wobei ihre Deckel auf still.
- Die Aluminiumfolie wird entfernt und verworfen. Die Watte wird mit dem kleinen Finger entfernt. Es ist in dem kleinen Finger die ganze Zeit gehalten, nicht weglegen.
- Die Öffnung des Kolbens wird geflammt Bakterien auf der Außenseite der Felge zu töten.
- Der Deckel der Platte ist gerade hoch genug angehoben, damit die Platte gegossen wird, und die Schale wird schnell Hälfte mit Agar gefüllt.
- Der Deckel ersetzt wird, verwirbelt die Platte sanft gleichmäßige Verteilung des geschmolzenen Agar zu gewährleisten, dann für mindestens 20 Minuten auf der Bank stehen gelassen zu verfestigen.
- Sobald alle Platten gegossen werden, wird der Kolben reflamed Mund und die Watte wieder eingefügt. Nicht verwendete Agar ist noch steril.
Damit die Rückverfolgbarkeit wird eine Chargennummer in den Kolben zugeordnet geschrieben auf den Platten mit ihm gegossen.
Vor der Inokulation wird wichtige Information auf der Unterseite der Platten geschrieben, in der Nähe der Felge:
- Tag der Impfung
- Inkubationstemperatur
- Inkubationsdauer
- Mikroorganismus beimpft
Streaking bearbeiten
Das gebräuchlichste Verfahren zur Herstellung einer Agarplatte inokuliert Ausstreichen wird.
Was soll passieren, dass einzelne Bakterienzellen durch die Streifen isoliert werden, und wenn die Platte wird inkubiert, bilden diskrete Kolonien, die jeder aus nur einem Bakterium begonnen wird.
Weihnachtsbaum bearbeiten
Dieses Muster wird für die Kultur von Urin verwendet. Eine kleine Schleife wird in den Urin eingetaucht wird, und eine einzelne Strähne wird auf die Mitte der Agarplatte hergestellt nach unten. mehrfach im rechten Winkel zu dem ersten Streifen ging durch die Streifen dann wird die Schleife in und aus schwankt.
Stichkultur bearbeiten
Eine Nadel geflammt wird dann in die Kultur eingetaucht. Es wird dann in ein kleines steriles Glas Nähragar erstochen. Wenn die Bakterien anaerob wachsen sie, sonst tun sie es nicht.
Vorbereiten eines Rasens bearbeiten
Ein Rasen wird häufig zum Testen Empfindlichkeit gegen Antibiotika, oder für die Arbeit mit Bakteriophagen verwendet. Was wir brauchen, ist eine gleichmäßige und vollständige Ausbreitung des Wachstums in der ganzen Agar-Platte (ein „Rasen“). Um eine antibiotische Scheibe wird es ein klarer Bereich, in der gehemmten Bakterienwachstum ist; der Durchmesser dieses Bereichs kann gemessen werden, um herauszufinden, ob dieser Bakterienstamm gegen das Antibiotikum resistent ist.
Eine Möglichkeit, einen Rasen vorzubereiten, ist die Verwendung eines 0,5 McFarland-Suspension von Bakterien in Kochsalzlösung (dies bedeutet, dass die Kochsalzlösung nur leicht trüb gemacht wird.) Eine sterile Tupfer wird in diese Suspension eingetaucht, dann wird sie von der Seite bewegt, um die gesamte Agar-Seite nach unten Platte so die ganze Fläche abgedeckt ist. Die Platte ist um 90 ° gedreht, und die Tupfer Seite bewegt perpedicularly zum ersten Mal Seite. Dies wird noch einmal mit dem Abstrich gemacht um 45 ° gedreht.
Die Inkubation von Agarplatten bearbeiten
Die Platten werden mit dem Kopf nach unten zu verhindern Kondenswassertropfen sammeln auf der geimpften Oberfläche inkubiert.
Einige Platten werden bei 37 ° C in einem 5% CO 2 -Atmosphäre inkubiert: Die Temperatur und die Bedingungen, bei denen ein Teil der Bakterien des Körpers wachsen. Spezielle Inkubatoren können diese Bedingungen aufrechtzuerhalten.
Einige Bakterien müssen anaerob inkubiert werden (ohne Sauerstoff). Diese können in Behälter eingebracht werden, zusammen mit einer Substanz, die Sauerstoff entfernt, und dem dicht verschlossenen Behälter in der regulären Inkubator gestellt.
Pilze und einige Bakterien (z.B. Yersinien sp.), Sollte etwas kühlere inkubiert werden. Dies ist in der Regel 30 ° C und Raumluft oft verwendet wird.
Joghurtbakterien wachsen bei viel höheren Temperaturen (typischerweise
45 ° C). Sie sind daher particulally sicher zu verwenden, wenn die Mikrobiologie Lehre, vor allem für Kinder.
Campylobacter ist eine schwierige Bakterienarten zu wachsen. Es braucht besondere Agarplatten, plus seine eigene microaerophilic Umgebung.
Arten von Agarplatten bearbeiten
Sichere Entsorgung von Agarplatten bearbeiten
Wenn alle Manipulationen durchgeführt werden, wird die Bank erneut desinfiziert. Der letzte Schritt sollte sein, die Hände zu waschen gründlich mit antimikrobiellen Seife und heißem Wasser, bevor das Labor zu verlassen.