Wie der perfekte Näh Every zu Gast - Bitesize Bio
Herstellung von Agarplatten, ob sie enthalten LB, M9 oder irgendein anderes Medium, ist ein einfaches Verfahren. Aber es gibt ein paar Feinheiten, die Ihr Experiment töten, ein Chaos oder einfach nur führen, dass Sie Unannehmlichkeiten, wenn man sie falsch. Lassen Sie sich also genau auf der aktenkundig, wie die perfekte Agar-Platte zu machen.
Folgen Sie dieser und Sie werden große Platten erhalten - ohne Klumpen, Blasen oder überschüssige Feuchtigkeit - jedes Mal.
1. Stellen Sie das Medium nach oben nach dem Rezept, dann die gewünschte Menge an Agar (normalerweise etwa 1% w / v) dazu und rühre
Wenn Sie ohne Rührautoklaven, mit der argarose noch schwimmend auf der Oberseite der Flüssigkeit, erhalten Sie einen Agarose-Kuchen in dem Medium. Interessant, aber nutzlos
2. Autoklav für 25 Minuten
das Medium-Agar-Mix in einer Hartglasflasche Nach dem Autoklavieren Sie natürlich speichern kann, dann schmelzen sie in einer Mikrowelle oder Wasserbad bei Bedarf. Stellen Sie sicher, dass Sie vorgespannten Glasflasche verwenden oder dieser (siehe # 2) kann passieren,
3. Man kühlt das Medium-Agar-Mischung auf 55 ° C. Für routinemäßig konsistente Ergebnisse, tun, um die Kühlung für ein paar Stunden in einem 55 ° C Wasserbad
Agar beginnt bei etwa 50 ° C zu verfestigen. das Wasserbad bedeutet, dass Sie stets die Mischung auf knapp über der Erstarrungstemperatur abkühlen kann. Bevor ich ein Wasserbad verwendet, pflegte ich es nur in der Luft zu kühlen, sondern würde darüber unweigerlich vergessen und wieder Erstarrung zu finden hatte bereits begonnen - klumpig Platten sind nicht gut für die Verbreitung!
4. Fügen Sie alle Antibiotika oder Nahrungsergänzungsmittel
Sie können sicher sein, dass das Agar bei einer geeigneten Temperatur ist, weil Sie es im Wasserbad abgekühlt haben
5. Gießen der Platten. Verwenden etwa 30 ml für jede Platte in einem Durchmesser von 100 mm Platte
Je weniger Agar-Medium-Mix in jeder Platte, desto leichter werden sie austrocknen. 30 ml eine gute Menge für die Langzeitlagerung ist, 10 bis 20 ml ist in Ordnung, wenn Sie die Platten relativ bald verwenden werden. Aus Gründen der Einheitlichkeit würde ich empfehlen, eine serologische Pipette. Aufzusaugen 2-3 mLs mehr, als Sie Blasen in die Platte minimieren müssen bläst.
6. Lassen Sie die Platten einzustellen. Wenn es irgendwelche Blasen in den Platten sind, kurz die Flamme übergehen, um sie zu Pop.
Klassische Fehler: versuchen, die Platten zu bewegen, bevor der Satz nur für Ärger bringen. lassen Sie sie einfach in Ruhe!
7. Trocknen die Platten im laminaren Strömungshaube mit dem Deckel leicht für 30 Minuten ausgeschaltet wird (oder in einem 37 ° C Inkubator für 2-3 Stunden oder RT für 2-3 Tage).
das Trocknen der Platte ist sehr wichtig für die Platten zu speichern und wachsenden Kolonien auf ihnen. Wenn Sie sie nicht trocken, wird die Feuchtigkeit verdunsten und während der Lagerung oder während der Inkubation auf dem Deckel kondensiert und gibt Ihnen schrecklich nasse Platten mit zu arbeiten. Im schlimmsten Fall kann die Feuchtigkeit in die Plattierung Ihrer Zellen beeinflussen. Verwenden Sie ein Timer Sie daran zu erinnern, wenn die 30 Minuten auf, als - nach meiner Erfahrung - es ist sehr einfach über Ihre Platten zu vergessen und wieder Ihre Platten zu finden, sind in Agar Chips / Chips gedreht. Lecker.
Hallo!
Ich hatte Agarplatten letzte Woche vorbereitet und sie ohne Impfung gespeichert. Ich habe die Platten täglich Null Verschmutzung zu gewährleisten. 2 Tage vor (das heißt etwa 5 Tage waren älter) wurden die Platten noch nicht kontaminiert. Aber wenn ich heute die Platten geprüft kontaminiert.
Was schlagen Sie vor?
Wo haben Sie speichern die Platten? Wie haben Sie speichern sie (zum Beispiel in Folie eingewickelt oder in einem Beutel oder lose)? Ich hasse es so viele Fragen zu stellen, aber die Antworten werden mir helfen, zu beheben! # 128578;
Es gibt ein paar Möglichkeiten, wie Sie Ihre Platten stapeln können, um sie / trocken schnelles abkühlen, obwohl man gute sterile Technik vermeiden müssen Ihre Agar zu beeinträchtigen. Z.B. für Ronden können Sie eine ‚Agar Pyramide 'machen:
Ich gieße eine Menge von quadratischen Platten, und Sie können die Deckel von etwa fünfundvierzig Grad drehen, um die Agar Luft ausgesetzt zu lassen, während Sie die nächste Platte auf der Oberseite setzen. Wieder mit dem Vorbehalt, dass Ihre Technik gut sein muss - bleiben Sie nicht Ihre Finger in dem Agar, und so weiter.
Ich halte eine kleine Charge von sterilen, pH-eingestellte flüssiger Medien im Kühlraum, so dass, wenn ich Platten in einer Prise benötigen, kann ich nur Agar und Autoklaven hinzufügen. Es muss allerdings ziemlich regelmäßig geändert werden!
Hoffe das hilft,
Peter
hey nick Ich habe versucht, diese und funktionierte nicht. Wie viel Zeit wird für Bakterien benötigt in den Petrischalen mit Agar zu wachsen.
Ich bin nicht Nick, aber in der Regel brauchen Sie etwa 12 Stunden auf einem Minimum.
Die richtige Trocknung ist auch wichtig. Nachdem die Platten gesetzt haben, ich sie übergibt (sie in der Regel in einem Stapel von 10 bis 20 Platten sind) und sich auf dem Labortisch über Nacht verlassen (oder länger). Dies führt dazu, überschüssige Feuchtigkeit zurück in den Agar absorbiert, nicht auf den Deckel zu kondensieren. NB Ich gieße meistens Hefe-Agar-Medien, die 2% Agar hat.
Hallo,
hat Antibiotika zu einer bereits gegossen Platte jemand Erfahrung in hinzufügen?
(Zum Beispiel, wenn Sie in Eile sind)
Vielen Dank…
Papierscheiben mit Antibiotika imprägniert sind zur antimikrobiellen Empfindlichkeitstests routinemäßig eingesetzt. Die Scheiben sind rechts oben auf den Agar gelegt und antibiotische fließt dann in das umgebende Agar in klaren Inhibitionszonen führt.
In ähnlicher Weise ist es in der Tat möglich, die Antibiotika, die auf der Oberfläche der Agarplatten vor der Zugabe von Bakterien zu verbreiten.
Ich habe dies gelegentlich geschehen. Ich habe normalerweise 1000x Aktien, die ich 20 & mgr; l ausbreiten müssen auf einer 20 ml Platte würde bedeuten würde, so dass ich den Bestand 1:10 und dann die Platte 200 & mgr; l Antibiotikum in der Regel verdünnt, es trocken zu lassen, bevor die Zellen zu verbreiten.
Nachdem ich auf das richtige Volumen von Agar in jeder Platte erforderlich gewöhnt wurde, jetzt ich meine Platten in einem Stapel gießen - das heißt, ich meine leeren Stapel von dem unteren Deckel aufzunehmen, die letzte Base aussetzt, gieße, ersetzen Stapel, nächste schnappen Deckel nach oben, gießen, ersetzen Stapel ... etc.
Das macht viele Platten (hunderte) zu einem Zeitpunkt sehr einfach, Gießen, wie sie wird einfach eine Frage der langsam Verschieben des Stapels auf der Rückseite der Bank bewegen mehr gießen schließen, um Platz für zum bunsen (das heißt in dem sterilen Bereich). * Denken Sie daran, gestapelten Platten länger eingestellt werden. *
Auch, wenn Sie in einer laminaren Strömung schmollen, sie abgebunden und trocken schneller, und Sie nicht über einen Bunsenbrenner in der Strömung müssen.
Ich hoffe, das hilft.
Eine Kühle Agar Flasche ist auch viel einfacher zu halten, während es aus auf Platten gegossen, auch sehr heiß Agar werden die Deckel Ihrer Petrischale verformen.
Wenn Agar bilden, nur auf 3/4 des Volumens der Flasche bilden. Dies ermöglicht es Raum für Blasen steigen, während das Agar in einer Mikrowelle schmelzen. Spart Zeit und Mühe von den Innenseiten der Mikrowelle zu reinigen ist.