Der Dot Blot, Innova Biosciences
Der Dot Blot
Eine einfache, aber effektive Detektionsverfahren
Dot-Blots sind sehr ähnlich wie Western-Blots, dass sie die Verwendung von Antikörpern umfassen ein Protein zu identifizieren, die an eine Membran gebunden ist. Sie stellen jedoch keine elektrophoretische auf einem Gel Proteintrennung erfordern; die Testprobe wird einfach auf die Membran getüpfelt auf und dann nachgewiesen.
Aufgrund des Fehlens einer Proteintrennungsschritt kann nicht Dot-Blots, das Molekulargewicht eines Proteins oder zur Unterscheidung zwischen verschiedenen Proteinformen (z.B. gespalten oder phosphorylierte Proteine) zu bestimmen, verwendet werden. Stattdessen sind Dot-Blots bequem, die Proteinkonzentration in Rohpräparationen wie Gewebekulturüberstand oder Aszites zum Abschätzen, zur Bestimmung, ob ein Antikörper-basiertes Detektionssystem effektiv funktionieren wird, oder eine geeignete Antikörperkonzentration für Western-Blotting identifiziert.
Die wichtigsten Schritte eines traditionellen Dot-Blot-Test sind wie folgt:
Verwendung von Dot-Blots Proteinkonzentration abzuschätzen
Durch Spek kann ein gereinigtes Protein, das in einer Reihe von bekannten Konzentrationen an eine Membran, ein Dot-Blot verwendet werden, um die Konzentration eines Zielproteins zu schätzen, in einer Testprobe. Die Konzentration des Proteins in der Testprobe kann aus der seriellen Verdünnung von gereinigtem Protein hochgerechnet werden.
Abbildung 1. Auf der linken Seite der Membran zeigt eine Verdünnungsreihe von gereinigtem Protein, während die rechte Seite drei verschiedene Verdünnungen der Testprobe enthält. Die Serienverdünnung kann verwendet werden, um die Konzentration des Proteins in der Testprobe zu bestimmen.
Verwendung von Dot-Blots auf Antikörper-Basis-Detektionssystem zu bewerten
Verwendung von Dot-Blots eine geeignete Antikörperkonzentration zu identifizieren,
Die Vorteile des direkten Ansatzes sind wie folgt:
- Die nicht-spezifische Bindung wird vermieden, da sekundäre Antikörper, die nicht verwendet werden,
- Multiplexing ist möglich mit Antikörpern aus der gleichen Spezies
- Schneller, da es kein sekundärer Antikörper Inkubationsschritt ist und daher weniger Waschschritte
- Die Datenqualität wird durch Test Vereinfachung verbessert
Die Vorteile des Blitz-Link® umfassen:
- Es ist schnell und einfach zu bedienen
- Es benötigt nur 30 Sekunden Hands-on-Zeit
- Es gibt keine Trennschritte beteiligt, so dass Sie 100% Ihrer Antikörper oder Protein erholen
- Sie können von so wenig wie 10 ug auf ein Gramm beschriften oder mehr!
- Antikörper können kovalent an Gold-Nanopartikel in nur 15 Minuten verbunden werden
- Metall-Antikörper-Wechselwirkungen verhindert werden
- Keine pH-Titrationen erforderlich
- Verschiedene Oberflächenchemie zur Verfügung