Einen langfristigen Bestand von Bakterien
Einführung
Jedes Mal, wenn Sie erfolgreich eine Bakterienkultur mit einem Plasmid-Transformation oder wenn Sie einen neuen Bakterienstamm erhalten werden Sie einen langfristigen Bestand dieser Bakterien mögen. Bakterien können für Monate und Jahre gelagert werden, wenn sie bei -80 ° C und in einem hohen Anteil an Glycerin gespeichert sind.
- 40% Glycerinlösung
- Tag / Nacht-Kultur
- Kryoröhrchen / 1,5 ml Microfuge-Röhrchen
- Wählen Sie eine einzelne Kolonie des Klons aus einer Platte und wächst eine über Nacht in dem geeigneten selektierbaren flüssigen Medium (3-5ml).
- 0,5 ml von 40% Glycerin in H2 O auf eine kryogene Phiole.
- In 0,5 ml Probe aus der Kultur der Bakterien gespeichert werden.
- Vorsichtig vortexen die kryogenen Fläschchen, die Kultur und Glycerin ist gut gemischt, um sicherzustellen.
- Alternativ mischen pipettieren.
- Auf der Seite der Fläschchen Liste aller relevanten Informationen - Teil, Vektor, Stamm, Datum, Forscher usw.
- Frieren Glycerolstammlösung in flüssigem Stickstoff und Speicher in einer -80 ° C Gefrierschrank.
- Dies wird auch eine gute Zeit, um die Belastung Informationen und notieren Sie die Position aufzeichnen.
- Während es möglich ist, einen langfristigen Bestand von Zellen in der stationären Phase zu machen, sollte idealerweise Ihre Kultur in der logarithmischen Wachstumsphase sein.
- Bestimmte Antibiotika im Medium sollte zuerst entfernt werden, da sie angeblich giftig im Laufe der Zeit ab) sind Tetracycline. Dazu drehen die Kultur nach unten und resuspendieren in demselben Volumen gerade LB-Medium.